Lara Croft (spielbar)
Die schöne und taffe Archäologin begibt sich gerne auf waghalsige Abenteuer. Immer mit dabei sind ihre zwei Pistolen, sowie alles mögliche an nützlichen Ausrüstungsgegenständen, wie Bomben und den Enterhaken. Doch sie ist nicht länger die einzige mit archäologischem Fachwissen und einem Hang zum Abenteuer.
Carter Bell (spielbar)
Carter Bell ist neu im Lara Croft-Universum und macht ihr direkt Konkurrenz. Genau wie Lara ist er ein Archäologe und wird von Gefahren magisch angezogen. Sowohl Lara, als auch Carter tragen eine Fackel bei sich, mit der sie dunkle Ecken ausleuchten können. Mit ihrem Enterhaken können sie Abgründe überwinden und eine Brücke für ihre Mitspieler bauen. Wäre doch eine Schande, wenn man den Enterhaken mit seinen Freunden darauf mitten über einer Stachelfalle einziehen würde…
In Lara Croft: Relic Run ist Carter ebenfalls Teil der Handlung. Er ist verschwunden und Lara begibt sich auf die Suche nach ihm.
Horus (spielbar)
Horus ist in der ägyptischen Mythologie der Gott des Himmels und des Lichts (Sonnengott). In Lara Croft und der Tempel des Osiris ist er einer der zwei ägyptischen Gottheiten, die Lara auf ihrem Abenteuer beschützen. Mit seinem Stab kann er Objekte bewegen und mit vielen Dingen interagieren. Zusätzlich kann er eine magische Barriere um sich oder andere errichten und dadurch Schaden verhindern oder um Verbündete über Wasser oder auf höhere Ebenen zu befördern.
Isis (spielbar)
Auch wenn der Name Isis durch aktuelle Ereignisse in der Welt nicht sonderlich gut behaftet ist, spielt die ägyptische Gottheit Isis in Lara Croft und der Tempel des Osiris eine wichtige Rolle. Im Spiel besitzt sie die gleichen Fertigkeiten wie Horus und unterstützt ihre menschlichen Mitspieler mit ihrer Magie. Im alten Ägypten wurde sie als Göttin der Geburt, aber auch des Todes verehrt.
Osiris
Der einzige Gott, der stark genug ist, um Set zu stoppen. Das Hauptziel des Spieles ist es, ihn zu retten und wiederzubeleben.
Set
Hauptgegner, der in der Unterwelt Duat gefangen gehalten wurde, bevor er versehentlich von Lara und Carter befreit wurde.